篇一：实验三、标准溶液的配制
实验三、标准溶液的配制
3.1 内容提要
在介绍标注溶液配制容量仪器使用方法的基础上，练习标准溶液配制的基本操作。
3.2 目的要求
1. 初步掌握容量瓶和移液管等容量仪器的使用方法。
2. 学会标准溶液的配制方法。
3.3 实验关键
标准溶液配制方法的掌握
3.4 预备知识
1. 移液管与吸量管
移液管与吸量管都是准确移取一定量溶液的量器。移液管是一根细长而中间膨大的玻璃管，管颈的上端有一环形标线，膨大部分标有它的容积和标定时的温度，如图3.1(1)所示。在标定温度下，使溶液的弯月面与移液管标线相切，让溶液按一定的方式自由流出，则流出的体积与管上标示的体积相同。
吸量管是具有分刻度的玻璃管，如图3.1(2)所示。它一般只用于量取小体积的溶液，吸量管的准确度不及移液管。一种吸量管的刻度是一直刻到管口，使用这种吸量管时，必须把所有的溶液放出，体积才符合标示数值；另一种的刻度只刻到距离管口尚差1-2cm处，使用时，只需将液体放至液面落到所需刻度即可。
移液管的操作方法为；移取溶液前，用小滤纸片将管尖端内外的水吸净，然
后用待移取的溶液将移液管润洗2～3次，以保证待移取的溶液浓度不变。
管经润洗后移取溶液时，一般用右手大拇指和中指拿住管颈标线上方，将管直接插入待移液体液面约1～2cm深处。管尖不要插入液面太浅，以免液面下降时造成空吸，也不应伸人太深，以免移液管外壁附有过多的溶液。左手握住洗耳球，排除球内空气，将球尖端对准移液管管口，慢慢松开洗耳球，溶液被吸人管内。吸液时，应注意管尖与液面的位置，应使管尖随液面下降而下伸，当管内液面上升到刻线以上时，移去洗耳球，迅速用右手食指堵住管口。左手改拿盛待移液的容器，将其倾斜成约45°，把移液管提离液面，管的末端靠在容器的内壁上(移液管应直立)，略松食指，用拇指和中指来回捻动移液管，使管内液面慢慢下降，直至溶液的弯月面和标线相切时，立即用食指压紧管口，取出移液管。左手拿盛接溶液的器皿并略倾斜，使内壁与插人的移液管管尖成40°左右。此时移液管应垂直，松开食指，让管内溶液自然地全部沿管壁流下(如图3.2所示)。待液面下降到管尖后，等15s左右，取出移液管，应注意，切勿把残留在管尖部分的溶液吹出，因为工厂生产检定移液管时已考虑了末端保留溶液的体积(如果移液管上标明“吹”字，则应将末端保留溶液吹出)。但应注意，由于一些管口尖端做得不很圆滑，因而管尖部分不同方位靠着容器内壁时残留在管尖部分体积稍有差异，为此，可等15s后，将管身往左右旋动一下，这样，管尖部分每次存留的体积仍基本相同，不会导致平行测定时的过大误差。
吸量管的操作方法与移液管相同，用吸量管时，总是使液面从某一分度(通常是最高线)落到另一分度，使两分度间的体积刚好等于所需体积。因此，很少把溶液直接放到吸量管的底部。同一实验中，尽量使用吸量管的同一管，且尽量使用上部分而不采用末端收缩部分，以减少误差。
移液管与吸量管使用后，应洗净放在移液管架上。
2.容量瓶
容量瓶是用于配制标准溶液或稀释一定量溶液到一定体积的器皿，常用于测量容纳液体的体积。它是一种细颈梨形的平底玻璃瓶，带有玻璃塞，其颈上有一标线，在指定温度下，当溶液充满至弯月液面与标线相切时，所容纳的溶液体积等于瓶上所示的体积。
a．容量瓶的准备 使用容量瓶前必须检查容量瓶是否漏水或标线位置距离
瓶口是否太近，漏水或标线离瓶口太近(不便混匀溶液)的容量瓶不能使用。
检查是否漏水的方法如下：将自来水加入瓶内至标度刻线，塞紧磨口塞，右手手指托住瓶底，左手食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分(如图3.3所示)，将瓶倒立2min，观察有无渗水现象。如不漏水，再将瓶直立，转动瓶塞180°后倒立2min，如仍不漏水，即可使用。用橡皮筋或细绳将瓶塞系在瓶颈上。
容量瓶应洗涤干净，洗涤方法同前。
b．操作方法 如果是用固体物质配制标准溶液或分析试液时，先将准确称取的物质置于小烧杯中溶解后，再将溶液定量转入容量瓶中，定量转移方法如图
3.4所示。右手拿玻璃棒，左手拿烧杯，使烧杯嘴紧靠玻璃棒，而玻璃棒则悬空伸入容量瓶口中，棒的下端靠住瓶颈内壁，慢慢倾斜烧杯，使溶液沿着玻璃棒流下，倾完溶液后，将烧杯嘴沿玻璃棒慢慢上移，同时将烧杯直立，然后将玻璃棒放回烧杯中。用洗瓶吹出少量蒸馏水冲洗玻璃棒和烧杯内壁，依上法将洗出液定量转入容量瓶中，如此吹洗、定量转移5次以上，以确保转移完全。然后加水至容量瓶2/3容积处(如不进行初步混匀，而是用水调至刻度，那么当浓溶液与水在最后摇匀混合时，会发生收缩或膨胀，弯月面不能再落在刻度上)，将干的瓶塞塞好，以同一方向旋摇容量瓶，使溶液初步混匀。但此时切不可倒转容量瓶，继续加水至距离刻线lcm处后，等1~2min，使附在瓶颈内壁的溶液流下，用滴管滴加水至弯月下缘与标线相切，盖上瓶塞，以左手食指压住瓶塞，其余手指拿住标度刻线上瓶颈部分，右手全部指尖托住瓶底边缘，将瓶倒转，使气泡上升到顶部，摇荡溶液，再将瓶直立，如此倒转让气泡上升到顶部、摇荡溶液??如此反复10余次后，将瓶直立，由于瓶塞部分的溶液未完全混匀，因此打开瓶塞使瓶塞附近溶液流下，重新塞好塞子，再倒转，摇荡3～5次，以使溶液全部混匀。
如果把浓溶液定量稀释，则用移液管吸取一定体积的浓溶液移人瓶中，按上述方法稀释至刻线，摇匀。
使用容量瓶应注意下列事项：
不可将其玻璃磨口塞随便取下放在桌面上，以免玷污或搞错，可用右手的食指和中指夹住瓶塞的扁头部分，当须用两手操作不能用手指夹住瓶塞时，可用橡皮筋或细绳将瓶塞系在瓶颈上。
不可用容量瓶长期存放溶液，应转移到试剂瓶中保存，试剂瓶应先用配好的溶液荡洗2～3次后，才可盛放配好的溶液。热溶液应冷却至室温后，才能定量转移到容量瓶中，容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不可在电炉等加热器上加热，如需使用干燥的容量瓶，可用乙醇等有机物荡洗晾干或用电吹风的冷风吹干。
如长期不用容量瓶，应将磨口塞部分擦干并用小纸片将磨口隔开。
3.5 实验原理
标准溶液的配制方法有间接配制和直接配制两种。间接配制是不能得到符合基准物条件的物质（如NaOH 、HCl ），先配置近似浓度的标准溶液，再用基准物质或另一种已知浓度的标准溶液来标定它的浓度。直接配制法是用基准物质（如K2Cr2O7)来直接配置标准溶液。因为这些基准物质能够符合基准物质条件，容易得到。此法溶液浓度由计算而得，浓度不必标定。
3.6 仪器、药品及材料
量筒，试剂瓶，容量瓶，移液管。NaOH( s ), HCl, NaCl ( s )。
3.7 实验步骤
1. 酸、碱标准溶液的配制
（1）0.1mol/L HCl溶液的配制 用量筒量取1:1 HCl 约8.5mL，倒入500mL试剂瓶中，加水稀释至500mL，盖好玻璃塞，充分摇匀，贴上标签，注明名称、日期。
（2）0.1mol/L NaOH溶液的配制 在台秤上称取2g固体NaOH于小烧杯中，加100mL水，使之完全溶解，转入500mL试剂瓶中，稀释至500mL，用橡皮塞塞紧，充分摇匀。贴上标签。
2. NaCl标准溶液的配制
（1）0.100mol/L NaCl标准溶液的配制
准确称取基准物质NaCl 0.584g于小烧杯中，加入少量水溶解后，定量转
移至100mL容量瓶，稀释至刻度并摇匀。
（2）0.0100mol/L NaCl标准溶液的配制
准确移取0.100mol/L NaCl标准溶液10.00mL于100mL容量瓶中，稀释至刻度并摇匀。
3.8 思考题
1. 量筒在使用之前需要润洗吗？
2. 能不能使用容量瓶直接配制准确浓度的NaOH标准溶液？
3. 0.100mol/L NaCl标准溶液在配制过程中，称量固体NaCl时应保留几位有效数字？应采用何种方法称量？
4. 刻度移液管的使用应注意哪些问题？
篇二：生化实验溶液的配制
甲基红(MR)试验／VP试验
.原理 细菌分解培养基中的葡萄糖产酸，当产酸量大，使培养基
的pH降至4。5以下时，加入甲基红指示剂而变红E甲基红的变色范围为pH4．4(红色)～pH 6．2(黄色))，此为甲基红试验。当细菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再变为乙酰甲基甲醇；乙酰甲基甲醇又变成2，3—丁二烯醇，2，3—丁二烯醇在碱 性条件下氧化成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物，此为VP试验。这两个试验密切相关，对一种细菌而言，两者只能居其一
.培养基及试剂
葡萄糖蛋白胨水溶液。
甲基红试剂： 甲基红0．02g，95％酒精60mL，蒸馏水40ral。
VP试剂： 甲液、：a—萘酚酒精溶液(o—萘酚5g，无水乙醇100mL)。乙液：KOH溶液(KOH40g，水l00mL)o将甲液和乙液分别装于棕色瓶中，于4～10C保存。或：硫酸铜1g，浓氨水40mL，10％KOH950mL，蒸馏水10mLo
MR试验方法 取一种细菌的24h培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37C培养48～72h，取出后加甲基红试剂3～5滴，凡培养液呈红色者为阳性，以??十”表示；橙色者为可疑，以“±”表示；黄色者为阴性，以“― ”表示。
VP试验方法 取一种细菌的?24h纯培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37'C培养48～72ho取出后在培养液中先加VP试剂甲液0.6mL，再加乙液 0.2mL，充分混匀。静置在试管架上，15min后培养液呈红色者为阳性，以“ +”表示；不变色为阴性，以“—”表示。1h后可出现假阳性。或者可以用等量的硫酸铜试剂于培养液中混合，静置，强阳性者约5min后就可产生粉红色反应。
硫化氢试验
原理 细菌分解含硫氨基酸，产生HS，与培养基中的醋酸铅或FeS04发生反应，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。
培养基 可用成品微量发酵管、醋酸铅琼脂或三糖铁琼脂斜
面。
微量法 取一种细菌纯培养物，接种于H2S微量发酵管中，置
37℃培养24h后观察结果。培养液呈黑色者为阳性，以“ +”
表示，无色者为阴性，以“—”表示。
常量法 用接种针蘸取纯培养物，沿试管壁作穿刺醋酸铅琼脂
或三糖铁培养基，37℃培养24—48h或更长时间，培养基变黑者为阳性。或将纯培养物接种于肉汤，肝浸 汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面，在试管壁和棉花塞间夹一
6．5cmX0．6cra大小的试纸条(浸有饱和醋酸铅溶液*)，培养于37℃，观察纸条变黑者为阳性。
氧化型与发酵型(O／F)的测定
原理 不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下称为氧化，无氧条件下称为发酵。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
培养基 蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0．3g，葡萄糖10g，琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mLo将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热 溶解，校tpH至7．2，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解；分装试管，3～4mL僧；115'C，高压蒸汽灭菌20min，取出后冷却成琼脂柱。
试验方法 挑取18～24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中l管覆盖lmL灭菌的液体石蜡，37C培养48h或更长时间，最长可达7d。
结果判定 只在没有覆盖石蜡的一管发酵糖产酸或产酸产气者属氧化型；两管均发酵糖产酸或产酸产气者为发酵型；两管都不生长者不予判定结果。
糖类分解试验
原理 细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，是受遗传基因所决定的，是细菌的重要表型特征，有助于鉴定细菌，含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
培养基 可用市售各种糖或醇类的微量发酵管。
试验方法 取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖培养基内，开口朝下，置灭菌培养皿中。37C培养24h，观察结果并记录。如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色(培养基内指示剂溴甲酚紫由pH7，0(紫色)一pH 5．4(黄色))，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
结果判定．用符号表示
无变化 -培养液仍为紫色
产酸． 培养液变为黄色
产酸又产气 ⊕ 培养液变黄，并有气泡
吲哚(靛基质)试验
原理 有些细菌(如大肠杆菌)能分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二
氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成红色。
培养基 Dunham氏蛋白胨水溶液。蛋白胨1g，氯化钠0。5g，蒸馏水100mL。
将蛋白胨与氯化钠加入蒸馏水中，加热溶解后调pH为7．6，再煮沸加热30min。待冷后用滤纸过滤，分装，12l℃高压蒸汽灭菌15min。
Ehrlich氏试剂 对位二氨基苯甲醛1g，无水乙醇95mL，浓盐酸20mL。先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。
Kovac氏试剂 对位二氨基苯甲醛5g，戊醇(或异戊醇)75mL，浓盐酸25mL。
试管试验法 以接种环将待检菌新鲜斜面培养物接种于Dunham氏蛋白胨水溶液中，置37C培养24—48h(可延长4～5d)；于培养液中加入戊醇或二甲苯2'~3mE，摇匀，静置片刻后，沿试管壁加入Ehrlich氏或Kovac氏试剂2mL。
斑点试验法 将一片滤纸放在培养皿的盖子上或一张载玻片上；滴加l～1．5mL试剂液于滤纸上使其变湿；取18～24h~t琼脂平板培养物涂布于浸湿的滤纸上；在l一3min内棕色的试剂由紫红变为红色者为阳性。
加 热试验法 将一小指头大的脱脂棉，滴上两滴Ehrlich氏试剂，再在同：d处加滴两滴高硫酸钾(K2S2O8)饱和水溶液，置于含培养液的被检试管中，离液面约 L5cm；将被检试管放人烧杯或搪瓷缸水浴煮沸为止；脱脂棉上出现红色者为阳性。若将试剂加到液体中，吲哚和粪臭素均呈阳性反应，而用此法，只是吲哚(具 挥发性)呈阳性反应。
氧化酶试验
原理 测定细菌细胞色素氧化酶的产生，阳性反应限于那些能够在氧气存
在下生长的同时产生细胞内细胞色素氧化酶的细菌。
试1％四甲基对苯二胺(Tetra-methy-p-phenylenediaminedihydrochlo—ride)，
新鲜配制，装棕色瓶贮存，4℃，可保存1个月
试验方法 加2～3滴试剂于滤纸上，用牙签挑取1个菌落到纸上涂布，
观察菌落的反应。阳性反应在5～10s内由粉红到黑色，15min后可出现假阳性反应。也可将试 液滴在细菌的菌落上，菌落呈玫瑰红然后到深紫色者为阳性。也可在菌落上加试液后倾去，再徐徐滴加用95％酒精配制的1％的o—萘酚溶液，当菌落变成深蓝色 者为细胞色素氧化酶阳性o
触酶试验
原理 本试验是检测细菌有无触酶的存在。过氧化氢的形成看作是糖需氧
分解的氧化终末产物，因为H202的存在对细菌是有毒性的，细菌产生酶将其分解，这些酶为触酶(过氧化氢酶)和过氧化物酶。
试剂 3％H202(新配)。
试验方法 可用接种环将一菌落放于载玻片的中央，加l滴3％H2Q于菌落上，立即观察有无气泡出现，也可在菌落和H202混合物之上放一张盖玻片，可帮助检出轻度反 应，还可降低细胞的气溶胶颗粒的形成。或直接将3％H202加到培养琼脂斜面或平板上直接观察有无气泡出现(血琼脂平板除夕卜)取10g醋酸铅溶于50ml沸蒸馏水中即为饱和醋酸铅溶液。
脲酶试验 ?
原理 细菌分解尿素产生两分子氨，使培养基pH升高，指示剂酚红显示出红色，即
证明细菌有脲酶。
培养基 尿素微量发酵管或Christensen氏尿素琼脂培养基，蛋白胨10g，葡萄糖18g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，0．4％酚红溶液3mL，琼脂 20g，20％尿素溶液100mI~，蒸馏水900mL。除尿素溶液外，将上述成份依次加入蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.2，121℃高压蒸汽灭菌 15min，待冷至50—55C左右加入已滤过除菌的尿素溶液，混匀分装于灭菌试管，放成斜面冷却备用。
试验方法 用接种环将待检菌培养物接种于尿素琼脂斜面，不要穿刺到底，下部留作对照。置3712培养，于1—6h检查(有些菌分解尿素很快)，有时需培养24h到6d(有些菌则缓慢作用于尿素)。阳性反应，则琼脂斜面由粉红到紫红色。
淀粉水解试验
原理 有的细菌具有淀粉酶，能水解培养基中的淀粉成麦芽糖。淀粉水解后遇碘液不再呈蓝紫色反应。
培养基与试剂 3％可溶性淀粉琼脂平板(普通琼脂900mL加3％可溶性淀粉溶液100mL)和革兰氏碘溶液(见附录一)。
试验方法 将细菌划线接种于3％可溶性淀粉琼脂平板上，在3712培养24h。取出平板，在菌落处滴加碘液少许，观察。培养基呈深蓝色，说明淀粉未被水解，即淀粉酶阴性。能水解淀粉的细菌其菌落周围有透明的环(即淀粉酶阳性)。
石蕊牛乳试验
原理 石蕊是一种pH指示剂，当pH升至8．3时碱性显蓝色，pH降至4．5时酸性显
红色；pH接近中性，未接种的培养基为紫蓝色故称紫乳。石蕊也是一种氧化还原指示剂， 可以还原为白色，所以，石蕊牛乳(紫乳)是用来测定被检细菌几种代谢性质的一种鉴别
培养基。
培养基 加石蕊酒精饱和溶液于新鲜脱脂乳中，分装小管，经流通蒸汽灭菌而成。
试剂 石蕊酒精溶液的制备：88石蕊在30mL的40％乙醇中研磨，吸出上清液，加乙醇研磨，连续2次。加40％乙醇至总量为100mL，并煮沸lmin。取用 上清液，必要时可加几滴lmol／L盐酸使其呈紫色。现多用溴甲酚紫代替石蕊，即于100mI~脱脂乳中加1.2mL，1.6％溴甲酚紫酒精溶液。 试验方法与结果判定 将被检菌接种于紫乳，置3712温箱培养，观察结果。若细菌分解乳糖产酸，指示剂变色(石蕊为红色，溴甲酚紫为黄色)。若产酸产气，使牛乳酸凝，气体使凝 块中有裂隙，如产气荚膜梭菌呈“暴裂发酵”。若为紫色，表示乳糖未分解；若为蓝色表示乳糖虽未发酵，但细菌分解培养基中所出现的氮源物质而产碱所致。若指 示剂还原则为五色，常出现在酸凝块形成之后。 培养基 蛋白胨18，硝酸钾0．1～0．2g，蒸馏水100mI~。将上述成分放于蒸馏水中加热溶解，调pH至7．4，滤纸过滤，分装试管，12重℃高压蒸汽灭菌20min。在上述培养基中加入硫乙醇酸钠0．18即成厌氧菌用的硝酸盐培养基。
试剂 ，
甲液：甲基r萘胺0．6g，5mol／L冰醋酸100mL，稍加热溶解，用脱脂棉过滤，放棕色瓶中，4～1012保存。
乙液：对氨基苯磺酸0．8g，5mol／L冰醋酸100ml~，先用5mol／L冰醋酸30mL溶解对氨基苯磺酸，再加冰醋酸至100mL。放人带玻璃塞的玻璃瓶中4～10C保存。
试验方法与结果判定 把纯菌培养物接种到硝酸盐培养基中，在3712培养18～24h，再加试剂甲和乙各3—5滴，在30s内出现红色即为阳性。若无颜色出现，加少量锌渣，随后出现红色则是真正的阴性试验。
苯丙氨酸脱氨酶试验
原理 若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸，酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色。变形杆菌和普罗菲登斯菌以及莫拉氏菌有苯丙氨酸脱氨酶的活力。
培养基 DL—苯丙氨酸2g(L—苯丙氨酸1S)，氯化钠5g，琼脂12g，酵母浸膏3g，蒸馏水1000mL，磷酸氢二钠1g。分装于小试管内，121℃高压蒸汽灭菌10min，制成斜面。
试剂 10％FeCl3水溶液。
试验方法与结果判定 将被检菌18～24h培养物取出，向试管内注入0．2mL(或4～5滴．)10％FeCl3溶液于生长面上，变绿色者为阳性。
氨基酸脱羧酶试验
原理 这是肠杆菌科细菌的鉴别试验，用以区分沙门氏菌(通常为阳性)和枸橼酸杆菌(通常为阴性)，若细菌能从赖氨酸或鸟氨酸脱去羧基(一CIX)H)，导致培养基pH变碱，指示剂溴麝香草酚蓝就显示出蓝色，试验结果为阳性。若细菌不脱羧，培养基不变则为黄色。
培养基 蛋白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖18，蒸馏水1000mL，0．2％溴麝香草酚蓝溶液12mL。调整pH至6．8，在每100mL基础培养基内，加人需要测定的氨基酸0．5g，所
加的氨基酸应先溶解于1．5％NaOH溶液内(L—α—赖氨酸0．5g 1．5％NaOH溶液0．5mL，L-a-鸟氨酸0．5g 1．5％NaOH溶液0．5mL)。加入氨基酸后，再调整pH至6．8，分装于灭菌小试管内，每管lml，121℃高压蒸汽灭菌10min。
试验方法与结果判定 从琼脂斜面挑取培养物少许，接种于试验用培养基内，上面加一层灭菌液状石蜡。将试管放在37C培养4d，每天观察结果。阳性者培养液先变黄后变为蓝色，阴性者为黄色。 胆汁溶解试验
原理
低培养基与菌体细胞膜之间的表面张力而加速这一过程。本试验常用以鉴别肺炎链球菌和甲型溶血性链球菌。
试剂 2％去氧胆酸钠溶液。
试验方法与结果判定 在被检菌血琼脂平板上找到单个分散的菌落，在其上加1滴试液。再置37℃培养箱中30min后取出观察菌落，可见菌落消失，或尚有部分保留。培养菌在肉汤中生长，而且固体培养平板上菌落周围形成一个黑洞(孔)者是D群链球菌的标志。
明胶液化试验
原理 明胶是一种动物蛋白质，某些细菌具有明胶液化酶，明胶经分解后，可呈现不同的特征，有利于细菌的鉴定。
培养基 明胶培养基。明胶12～15g，普通肉汤100mL。将明胶加入肉汤内，水浴中加热溶解，．调pH至7．2，分装试管，115℃高压蒸汽灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝
固。
试验方法与注意事项 分别穿刺接种被检菌18—24h培养物于明胶培养基，置22℃下培养，观察明胶液化状况。明胶低于20℃凝成固体，高于24℃则自行呈液化状态。因此，培 养温度最好在22℃，但有些细菌在此温度下不生长或生长极为缓慢，则可先放在37℃培养，再移置于4℃冰箱经30min后取出观察，具有明胶液化酶者，虽 经低温处理，明胶仍呈液态而不凝固。明胶耐热性差，若在100C以上长时间灭菌，能破坏其凝固性，此点在制备培养基时应注意。
β－半乳糖苷(ONPG)试验
原理 细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，尸种是夕—半乳糖苷酶透性酶(夕-galactosidasepermease)，它位于细胞膜上，可运送乳糖分子渗入细 胞。另一种为户半乳糖苷酶(β-gaalac-tosidase)，亦称乳糖酶(Lactase)，位于细胞内，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。具有上述 两种酶的细菌，能在24—48h发酵乳糖，而缺乏这两种酶的细菌，不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵菌只有β-D—半乳糖苷酶(胞内酶)，而缺乏β-半乳糖苷酶 透性酶，因而乳糖进入细菌细胞很慢，而经培养基中1％乳糖较长时间的诱导，产生相当数量的透性酶后，始能较快分解乳糖，故呈迟缓发酵现象。ONPG可迅速 进入细菌细胞，被半乳糖苷酶水解，释出黄色的邻位硝基苯酚(Orthonitrphenyl，ONP)，故由培养基液变黄可迅速测知夕—半乳糖苷酶的存 在，从而确知该菌为乳糖迟缓发酵菌。
ONPG培养基 邻硝基酚夕—半乳糖苷0．6g，0，01mol／LpH7．5磷酸缓冲液1000mL，pH7．5的灭菌1％蛋白胨水300mL。先将前两种成分混合溶解，过滤除菌，在无菌条件下
与1％蛋白胨水混合，分装试管，每管2～3mL，无菌检验后备用。购不到ONPG时，可用5％的乳糖，并降低蛋白胨含量为0．2％～0．5％，可使大部分迟缓发酵乳糖的细菌在1d内发酵。 试验方法 取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37C培养1～3h或24h，如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h内不变色。
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